動(dòng)態(tài)濁度法是測(cè)定內(nèi)毒含量的一種非常重要的方法

來(lái)源：http://www.xfzhuw.com/ 作者：余氯檢測(cè)儀 時(shí)間：2018-07-26

　　細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法通常也被人們稱(chēng)為鱟試驗(yàn)法，這種方法通常是用來(lái)對(duì)供試品當(dāng)中內(nèi)毒素含量的限定能否滿足相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定的一種非常重要的方法，當(dāng)前，國(guó)內(nèi)外比較常見(jiàn)的有凝膠法、濁度法和顯色法，在最新一版的中國(guó)藥典當(dāng)中將動(dòng)態(tài)濁度法規(guī)定為測(cè)定內(nèi)毒含量的一種非常重要的方法，這種方法主要是內(nèi)毒素和鱟試驗(yàn)當(dāng)中的炭原子發(fā)生反應(yīng)之后，被集火的凝固酶阻斷了膠原蛋白當(dāng)中的精氨酸肽鏈，這樣也就構(gòu)成了凝固蛋白。

　　1、材料

　　血塞通注射液，規(guī)格：2mL∶100mg，批號(hào)：99006，990311，990301，990415， 980954，云南昆明興中制藥廠。鱟試劑K4981L，規(guī)格：每瓶5.2mL，美國(guó)ENDOSAFE。細(xì)胞內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)981(每支9000EU)，中國(guó)藥品生物制品檢定所。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水7L95S，500mL，天津大冢制藥有限公司。BET-32C型細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定儀，天津大學(xué)無(wú)線電廠生產(chǎn)。

　　2、方法與結(jié)果

　　2.1細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定

　　按照相關(guān)規(guī)定當(dāng)中注明的公式內(nèi)容對(duì)最小的熱閾值進(jìn)行計(jì)算，在計(jì)算之后得到的血塞通注射液內(nèi)毒素限值為10EU/ml。

　　2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及可靠性

　　采用檢查用水將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行10倍和2倍的稀釋處理，從而使內(nèi)毒素濃度分別達(dá)到0.25、0.125、.0.0625、0.0313、0.0156和0.0078EU/ml稀釋系列，分別精確的量取2ml溶液，之后將其加入到已經(jīng)裝油濃度為1mol/ml的鱟試劑反應(yīng)試管當(dāng)中，將其均勻的混合在一起，同時(shí)還要插入BET-32C細(xì)胞內(nèi)的毒素與測(cè)定儀內(nèi)對(duì)其進(jìn)行全面的檢測(cè)，其中每一個(gè)濃度要重復(fù)的檢測(cè)三次，結(jié)果如表1所示：

　　最低的濃度為0.0078EU/ml，同時(shí)空白對(duì)照管在檢測(cè)時(shí)間之外，所以我們基本可以判斷標(biāo)準(zhǔn)曲線完全成立。

　　2.3干擾試驗(yàn)

　　2.3.1樣品稀釋倍數(shù)的計(jì)算

　　按照公式對(duì)其進(jìn)行了計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度為0.0078EU/ml，通過(guò)計(jì)算得到樣品試驗(yàn)過(guò)程中最大有效稀釋的倍數(shù)為1280倍。

　　2.3.2樣品溶液配制及預(yù)干擾試驗(yàn)

　　在試驗(yàn)的過(guò)程中將血塞通注射液采用內(nèi)毒素檢查用水將其稀釋到20、40、、80、160和320倍，將其記為Ai液，此外還要另外取5管用同樣的倍數(shù)對(duì)其進(jìn)行稀釋處理，同時(shí)還要在稀釋液當(dāng)中加入使得細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)液，標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為0.0625EU/ml，的細(xì)菌內(nèi)毒素不熬準(zhǔn)液，同時(shí)還要將其當(dāng)做陽(yáng)性對(duì)照管，將其記錄為B i液，分別取上述各液體0.2ml預(yù)先加入了0.1ml鱟試劑反應(yīng)當(dāng)中，同時(shí)將其均勻的在管內(nèi)混合之后放入到細(xì)菌內(nèi)菌素測(cè)定儀內(nèi)對(duì)其進(jìn)行全面的測(cè)定，其中每一個(gè)濃度重復(fù)2管，同時(shí)還要對(duì)平均的回收率進(jìn)行全面的計(jì)算，回收率的結(jié)果如表2所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　2.4干擾試驗(yàn)與熱源檢查

　　取4批血塞通注射液，同時(shí)將其分別稀釋到160被，同時(shí)還要制備陽(yáng)性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)曲線各個(gè)濃度系列，同細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定儀對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，每一個(gè)濃度點(diǎn)重復(fù)2管，此外還設(shè)置了空白對(duì)照，另外4批樣品同時(shí)開(kāi)展熱源檢查，結(jié)果如表3所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線：

　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)：4批血塞通注射液的回收率均在50%～200%范圍內(nèi)，表明無(wú)干擾影響，因此作為日常檢驗(yàn)選用160倍即可。

　　3、討論

　　3.1 由血塞通注射液的干擾試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：樣品溶液在80倍以下存在很強(qiáng)的抑制作用，從80倍開(kāi)始已無(wú)干擾，而在160倍時(shí)能得到更好的回收率，同時(shí)160倍也正好是添加內(nèi)毒素濃度λm時(shí)的試驗(yàn)稀釋倍數(shù)，因此日常檢查時(shí)取160倍稀釋液進(jìn)行。

　　3.2血塞通注射劑的藥理毒理

　　1)抗腦缺血作用：本品50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg腹腔注射能改善多發(fā)性腦梗死大鼠的腦水腫，促進(jìn)腦軟化灶的膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)，加速軟化灶的吸收，可使海馬區(qū)神經(jīng)元病變減輕。對(duì)沙土鼠短暫性腦缺血海馬遲發(fā)性神經(jīng)元損傷有一定的保護(hù)作用，可降低缺血后腦組織Ca[sup]2+[/sup]含量，減少死亡神經(jīng)元數(shù)量，增加神經(jīng)元密度。

　　2)抗心肌缺血作用：本品靜滴14天治療冠心病心絞痛患者，可使變化的ST-T段恢復(fù)，調(diào)整心電的不均一性。

　　3)其他作用：本品靜滴治療，可見(jiàn)冠心病、腦梗塞、II型糖尿病、肺心病等癥患者的血液流變學(xué)指標(biāo)改善，全血粘度和血漿粘度降低，血細(xì)胞比容和血小板聚集率減少，血沉速度減慢，纖維蛋白原含量減少。表明本品有改善流變性作用。本品還可使腦梗死患者、原發(fā)性高血壓患者甲襞微循環(huán)形態(tài)積分、流態(tài)積分、半周積分、總體積分降低;可使原發(fā)性高血壓患者袢周滲出明顯減少，管徑縮小，流速增加，紅細(xì)胞聚集性下降，袢頂淤?gòu)垳p輕以及管袢清晰度增加，水腫消退。表明本品有改善微循環(huán)作用。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]劉彩君，胡翮.動(dòng)態(tài)濁度法測(cè)定小牛血去蛋白提取物注射液細(xì)菌內(nèi)毒素含量[J].中國(guó)藥師.2012(07)

　　[2]蘇惠虹，沈小卓.低分子肝素鈣注射液的動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥.2011(01)

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